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DNA甲基化實驗服務

甲基化檢測

DNA的甲基化(Methylation) 是早發現的基因表觀修飾之一，甲基化僅修飾胞嘧啶，DNA的甲基化修飾是在DNA甲基化轉移酶的作用下使CpG雙核苷酸5端的胞嘧啶轉變為5-甲基胞嘧啶，由于CpG島主要位于基因的啟動子和第--外顯子區域，其甲基化修飾通常抑制基因的表達，去甲基化后基因重新活化和表達。DNA甲基化修飾方式在不改變基因序列的前提下實現對基因表達的調控。

主要檢測方式

1. MSP:甲基化特異性PCR (Methylation-specific PCR)即用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA.未甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶，甲基化的胞嘧啶不會發生改變，設計針對甲基化序列的引物進行PCR擴增,然后通過電泳等檢測手段檢測MSP擴增產物來確定位點是否存在甲基化。

2. BSP:亞硫酸氫鹽測序法(Bisulfite sequencing PCR)與MSP相似，用亞硫酸氫鹽將未甲基化胞嘧啶轉化為尿嘧啶，設計BSP引物進行PCR,擴增中尿嘧啶全部轉化為胸腺嘧啶，對PCR產物進行測序來判斷CpG位點是否甲基化。

• HRM:高分辨率溶解曲線法(High Resolution Melting)原理也是用亞硫酸氫鹽處理。未甲基化的胞嘧啶經PCR擴增變成胸腺嘧啶，樣品中的GC含量發生變化從而溶解溫度發生變化,從而確定位點是否發生甲基化?；谙拗菩詢惹忻傅?/span>

測序方法:

1.靶向富集甲基化位點的測序方法

2. SMRT測序法

結果展示

Assay Name: miR-152-S1(8CpG)

Sample ID: Si

Note:

實驗完成周期及交付標準

1.實驗周期: 3-5周

2.交付標準:甲基化檢測結果、實驗報告(實驗步驟、試劑、儀器等)

需確認的信息

1.目的基因及種屬

2.樣本類型(細胞、組織、血液等)

3.目的基因片段

參考文獻

[1] Sato S , Uemoto Y , Kikuchi T , et al. SNP- and haplotype-based genome-wide association studies for growth,

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[3] Yang Y , Scott S A. DNA Methylation Profling Using Long-Read Single Molecule Real-Time Bisulfite Sequencing

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single-molecule real-time bisulfite sequencing (SMRT-BS).J]. Bmc Genomics, 2015, 16(1):350.

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