微量BCA蛋白定量試劑盒說明書
MicroBCAProteinAssayKit
微量BCA蛋白定量試劑盒
Cat.No. K2011
保存：BSA 標準品：2-8℃
其 它 組分：室溫
組分說明
Catalogno. K2011
Volume 120ml
MicroBCAReagentA （MA） 120ml
MicroBCAReagentB （MB） 120ml
MicroBCAReagentC （MC） 6ml
BSA （2mg/ml） 2ml
產品簡介
BCA 蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產品是基于 BCA（BicinchoninicAcid）法研制而成，實現了對蛋白質進行快速、穩定、靈敏的濃度測定。其原理是在堿性環境下蛋白質分子中的肽鏈結構能與 Cu2+絡合生成絡合物，同時將 Cu 2+ 還原成 Cu +BCA 試劑可敏感特異地與Cu+結合，形成穩定的有顏色的復合物。在562nm 處有高的光吸收值，顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，可根據吸收值的大小來測定蛋白質的含量。本試劑盒專為低蛋白濃度樣品的蛋白定量而設計，可精*&確測定濃度為 2.5-200 μg/ml 的蛋白溶液，試劑盒的靈敏性高，平行性好，不同種蛋白之間的測量差異極低。本試劑同多種非離子型去污劑有較好的相容性。
注意事項
1. BSA 標準品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致（可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水進行稀釋）。
2. 操作中請佩戴手套。
3. 本產品僅限科研使用。
操作步驟
1. 稀釋 BSA 標準品：用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標準品。
管號 稀釋液用量（μl） 標準品用量（μl） 終濃度（μg/ml）
A 360 40 200
B 400 100（從A管中取） 40
C 250 250（從B管中?。? 20
（從 管中取）
D 250 250 C 10
E 250 250（從D管中?。? 5
F 250 250（從E管中?。? 2.5
G 250 0 0(空白)
2. 配制 MicroBCA 測試工作液：根據標準品和樣品的數量配制測試液。
試劑 MD 配制：4volumeMC+100volumeMB
測試工作液 WR 配制： 1volumeMA+1volumeMD
充分混勻后待用
3. 試管及微板檢測（蛋白濃度檢測范圍：2.5-200 μg/ml）
1）按上表準備好標準品及待測樣品。
2）將蛋白樣品和測試工作液 WR 按照 1:1（體積比）比例加入，充分混勻。在 60 度孵育 60 分鐘。
3）孵育完成后冷卻到室溫，在 562nm 處讀取吸光度值。
4）標準品與待測樣品的吸光度值要扣除空白對照的吸光度值，然后進行濃度的計算。
5）如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內，請重新稀釋樣品后再次測定。
附表
附表 1. 干擾物質表
化合物 耐受濃度 化合物 耐受濃度
緩沖液 去垢劑和變性劑
乙酸鹽 0.2M Brij35 1%
甘氨酸 1M CHAPS 1%
HEPES 0.1M 鹽酸胍 4M
MES 50mM NP-40 1%
MOPS 50mM 辛葡糖 1%
Na+-檸檬酸 ＜1mM SDS 1%
PIPES 50mM Triton X-100 1%
磷酸鈉 0.1M 糖類
乙酸鈉 0.2M pH 5.5 葡萄糖 10mM
TES 50mM 蔗糖 1M
Tris 0.1M 螯合劑
鹽類 EDTA 10mM 還原劑
硫酸銨 干擾
NaCl 1M β-巰基乙醇 50μM
尿素 3M DTT 1mM
極性化合物 其他
DMSO 5% 脂類 干擾
甘油 10% HCl/NaOH 0.1M
實驗代做服務：
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