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DH5α Competent Cell DH5α感受態細胞
點擊次數:1517 更新時間:2019-11-18

DH5α Competent Cell

DH5α感受態細胞

目錄號:YJ0808

保存條件:-80℃保存。

組分說明

 

 

Cat. No.                                          YJ0808B

Size                                                10×100 μl         

DH5α Competent Cell                       10×100 μl           

Control DNA pUC19,0.1 ng/μl           10 μl        

 

 

產品簡介

本產品是采用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞,可用于DNA 的熱擊轉化。DH5α是一種常用于質??寺〉木?,其 φ80lacZΔM15基因產物可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現 α互補,可用于藍白斑篩選。 recA1endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。使用pUC19質粒檢測,轉化效率可108,適用于的質粒DNA克隆并能保證高拷貝質粒的穩定復制。

 

注意事項

1. 感受態細胞一定要用干冰運輸。感受態細胞應在 -80℃下保存,不可反復凍融和放置時間過長,以免降低感受態細胞的轉化效率。

2. 轉化所有步驟均在無菌條件下操作。

3. 包裝中有0.1 ng/μlpUC19DNA,供對照試驗使用。

 

操作步驟

1.取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100 μl,可以根據實際情況分裝使用。

以 下 實 驗 以 50                                           μl 感 受 態 細 胞 為 例 。2.待感受態細胞融化后,向感受態細胞懸液中加入目的DNA根據實際情況加入適量

DNA,通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和),用移液器輕

輕吹打混勻,冰浴30分鐘。

342℃熱擊45秒,迅速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘。

4. 每個離心管中加入450 μl無菌的SOCLB培養基(不含抗生素),混勻后置于37℃ 搖床,150 rpm振蕩培養45分鐘使菌體復蘇。

  • 根據實驗需求,取適量已轉化的感受態細胞,加到含相應抗生素的 SOCLB固體瓊脂培養基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收, 倒置培養,37℃培養12-16小時。

注意:1)涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多,可取少量轉化產物涂布平板;若轉化的DNA總量較少,可取200-300 μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆數較少,可通過離心(4,000 rpm,2分鐘)后吸除部分培養液,懸浮菌體后將其涂布于平板中。

2) 新制備的固體培養基不易涂干,可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。

3) 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉化菌落數過少,可以將剩下的菌液再涂布新培養   基進行培養。

試劑盒免費代測和承接實驗

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